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核酸提取试剂 血液/体液
- 产品介绍
- 相关资料
一、产品简介
本试剂盒是基于高特异结合力生物纳米磁珠的核酸提取试剂盒，适用于新鲜血液、冷藏血液及-80℃冻存血液样本的总RNA提取。无需裂解红细胞收集白细胞即可直接提取全血样本中总RNA。主要原理是利用功能性生物磁珠表面的功能基团，将核酸从样品裂解产物中富集至磁珠表面，再利用磁性分离装置对磁珠进行分离，经洗涤液去除蛋白质和其他杂质、DNase I消化去除DNA，从而快速分离纯化RNA。整个过程无苯酚、氯仿和β-巯基乙醇等有害试剂，安全无毒，并且利用具有顺磁性的生物纳米磁珠，实现高通量自动化提取，提取产物可直接用于RT-PCR、qRT-PCR、Northern Blot、二代测序建库和分子克隆等下游实验。
二、主要组分
规格、裂解结合液、洗涤液 Ⅰ、洗涤液 Ⅱ、洗涤液 Ⅲ、磁珠、DNase Ⅰ、WRB Buffer 3、蛋白酶K、洗脱液，
预分装96孔板中已预装50 μL洗脱液，单独准备的2 mL洗脱液用于分光光度计测定浓度时做空白校准。
三、储存条件及有效期
DNase Ⅰ：-20℃保存，干冰或湿冰运输;WRB Buffer 3和磁珠：4℃保存长期保存，常温或湿冰运输。蛋白酶K：4℃保存或-20℃长期保存，常温运输。
其他试剂：常温保存和运输。试剂盒有效期为1年。
四、样本要求
本试剂盒主要适用于新鲜血液，2-8℃或-80℃保存的抗凝全血的RNA提取。本试剂盒中试剂仅用于本产品，不与其他产品混合使用。
五、实验数据
a.小体积体系不同血液样本的提取效果
使用本试剂盒对 4℃冷藏一周以内、30 天及 -80℃冷冻 30 天的人血样本进行总 RNA 提取，提取样本量为 250 μL。从琼脂糖凝胶电泳(图1)、纯度以及浓度(表1)等方面进行分析，结果显示，本产品对各种样本提取均可获得高纯度、条带完整的 RNA 产物。
RNA 提取产物进行 B2M 基因一步法 qRT-PCR 检测(图 2)，结果显示 Ct 值在 12-15 之间，满足下游 qPCR 检测需求。
b.大体积体系不同血液样本的提取效果
使用本试剂盒对 4℃冷藏一周以内、30 天及 -80℃冷冻 150 天的人血样本进行总 RNA 提取，提取样本量为 2.5 mL。从琼脂糖凝胶电泳(图 3)、
纯度以及浓度(表2)等方面进行分析，结果显示，本产品对各种样本提取均可获得高纯度、条带完整的 RNA 产物。
RNA 提取产物取 1 μg RNA 20 μL 体系反转录，之后 cDNA 产物取 5 μL 进行 B2M 基因 qPCR 检测(图 4)，Ct 值在 12-17 之间，满足下游qPCR 检测需求。
六、注意事项
1. 本试剂盒提取RNA实验中应全程避免RNase污染
(1)注意勤换手套，避免皮肤表面的RNase导致样品RNA的降解。
(2)使用RNase-free的枪头等塑料制品。
(3)若提取过程中需要用到其他玻璃器皿，可在150℃烘烤4-6 h。
2. RNA产量和纯度问题
(1)磁珠需充分晾干，否则会影响A260/A230的比值。
(2)提取-80℃冻存全血总RNA时，应避免反复冻融。
(3)可根据实验需要适当调整洗脱液体积，减少洗脱体积可提高产物浓度;使用S-16/S-48/N-96仪器时，洗脱液体积不得低于35 μL;使用N-96(大体积)核酸提取仪时，洗脱液体积不得低于60 μL，否则磁珠无法完全重悬会导致洗脱不充分，RNA得率降低。